PPP1R15B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408988-ACT

PPP1R15B（別名CReP）は、タンパク質ホスファターゼ1（PP1）をeIF2αの脱リン酸化へと誘導する制御サブユニットをコードしており、ストレス誘導性の翻訳抑制に対する主要な拮抗機構として機能します。eIF2αの脱リン酸化を促進することで、PPP1R15Bは攪乱後の全体的なタンパク質合成の回復を助け、ERストレス、プロテオスタシス、細胞生存プログラムと交差する統合ストレス応答（ISR）シグナルを調節します。このPP1依存的な制御は、ATF4/CHOP依存性ネットワークによって統御される下流の転写および代謝適応経路にも影響を及ぼします。eIF2αリン酸化ダイナミクスやISRのチューニングの破綻は、神経変性、代謝ストレス、がん細胞の適応など多様な状況で関与が示されており、PPP1R15Bはストレス耐性の機序研究に有用な結節点となります。

PPP1R15B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP1R15Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PPP1R15B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP1R15B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP1R15B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PPP1R15Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP1R15B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPPP1R15B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP1R15B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPPP1R15B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。