PPOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422376

概要

マウスのPpoxは、ヘム生合成の最終段階においてプロトポルフィリノーゲンIXをプロトポルフィリンIXへ酸化する反応を触媒する、ミトコンドリア内膜酵素プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（PPOX）をコードしています。ポルフィリン経路のフラックスを制御することで、PPOXは酸化的リン酸化、シトクロム機能、細胞のレドックス恒常性に必要なヘムタンパク質の産生を支えます。PPOX活性が障害されるとミトコンドリア代謝が乱れ、ポルフィリン中間体が増加し得ることから、このヘム代謝の節点は光過敏を伴うポルフィリン症や、より広範な酸化ストレス表現型と関連づけられます。したがってPpoxは、ミトコンドリアのバイオエネルギー、赤芽球系分化プログラム、ならびにヘム供給量と活性酸素種（ROS）処理の間の代謝クロストークを研究する上で重要です。

PPOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpox遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppox内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppoxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PPOXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PPOXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppox欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PPOXの機能に不可欠なPpoxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppoxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PPOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPPOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppox遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PPOX HDRプラスミド（m）および PPOX HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpoxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpox標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。