PPARα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400238-ACT

PPARα（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α）は、リガンドによって活性化される核内受容体型の転写因子であり、ヒト細胞における脂質分解とエネルギー恒常性を統括します。ミトコンドリアおよびペルオキシソームでのβ酸化、脂肪酸輸送、ケトン体生成、リポタンパク質代謝を制御する遺伝子プログラムを調節し、PPAR応答配列を介して代謝シグナルを転写出力へと統合します。PPARαの活性はAMPKやインスリンシグナルとも交差し、NF-κBや他の核内受容体とのクロストークを通じて炎症関連遺伝子の発現も調節します。PPARA関連経路の破綻は、メタボリックシンドローム、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝疾患、心代謝リモデリングなどの文脈でしばしば検討されており、脂質駆動性の細胞ストレスの機序研究における中心的な結節点となっています。

PPARα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPARAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PPARα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPARA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPARA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PPARαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPARA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPPARα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPARA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPPARα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。