Partículas Lentivirales de Activación (h) PP2Cα: sc-403960-LAC

PPM1A codifica la proteína fosfatasa 2C alfa (PP2Cα), una fosfatasa de serina/treonina dependiente de Mg2+/Mn2+ que actúa como regulador negativo de la señalización de estrés celular. PP2Cα desfosforila componentes clave de las vías MAPK, incluidos los módulos p38 y JNK, y modula la comunicación cruzada con NF-κB, el control del ciclo celular y los programas de apoptosis. A través de estas funciones, PPM1A ayuda a ajustar las respuestas inflamatorias y al estrés genotóxico, la diferenciación y la recuperación de los puntos de control. La actividad o expresión desregulada de PPM1A se ha relacionado con una homeostasis alterada de la señalización en la biología del cáncer, fenotipos de estrés metabólico y patologías asociadas al sistema inmunitario.

Las partículas de activación lentiviral PP2Cα (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PPM1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PP2Cα (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PPM1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PP2Cα. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PPM1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.