PP2A-B56-γ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402726-ACT

PPP2R5Cは、主要なセリン／スレオニン脱リン酸化酵素であるプロテインホスファターゼ2A（PP2A）のB56γ制御サブユニットをコードしており、触媒活性を特定の基質や細胞内局在へと誘導します。PP2A-B56γは、重要な制御因子の脱リン酸化を調整することにより、細胞周期進行、DNA損傷シグナル伝達、有糸分裂チェックポイントの忠実性、ならびにPI3K–AKT、MAPK、Wnt/β-カテニンなどの経路を介したシグナル伝達の制御に寄与します。PPP2R5Cの発現変化やPP2Aホロ酵素の構成の変動は、増殖、ゲノム安定性、ストレス応答に影響するリン酸化ネットワークを変化させ得ます。これらの特性により、PP2A-B56γは、ホスファターゼによって導かれる経路の絶縁（インスレーション）や、脱リン酸化の破綻が疾患関連表現型へと結び付く機序を研究するうえで有用な結節点となります。

PP2A-B56-γ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP2R5Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP2A-B56-γ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP2R5C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP2R5C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP2A-B56-γの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP2R5C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP2A-B56-γ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP2R5C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP2A-B56-γ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。