PP2A-B56-δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403020-ACT

PPP2R5D codifica a subunidade regulatória B56δ da fosfatase proteica 2A (PP2A), uma importante fosfatase de serina/treonina que molda a sinalização por fosforilação ao direcionar a seletividade de substratos e a localização subcelular do holoenzima PP2A. A PP2A-B56δ contribui para o controle da progressão do ciclo celular, da sinalização de dano ao DNA e da fidelidade do checkpoint mitótico ao modular os estados de fosforilação de nós-chave dessas vias, influenciando assim a proliferação e as respostas ao estresse. Por meio do ajuste, dependente de PP2A, de redes conduzidas por quinases como MAPK/ERK e PI3K/AKT, a PPP2R5D ajuda a manter a homeostase da sinalização e programas transcricionais ligados à diferenciação e à sobrevivência. A desregulação ou mutação de subunidades regulatórias da PP2A, incluindo PPP2R5D, está associada a paisagens de fosforilação alteradas relevantes para a biologia do câncer e para fenótipos do neurodesenvolvimento, sustentando seu uso como alvo mecanístico em estudos focados em vias.

PP2A-B56-δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP2R5D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2A-B56-δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP2R5D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP2R5D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2A-B56-δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP2R5D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2A-B56-δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2A-B56-δ em células tumorais com expressão de PPP2R5D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.