PP2A-Aα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400876-ACT

PPP2R1Aは、主要なSer/Thrホスファターゼであるプロテインホスファターゼ2A（PP2A）のAα足場サブユニットをコードしており、触媒サブユニットおよび制御サブユニットの会合を介して、基質特異性や細胞内局在を規定します。PP2A-Aαは、MAPK/ERK、PI3K–AKT–mTOR、Wnt/β-カテニン、ならびに細胞周期チェックポイント制御などの中核的シグナル伝達ネットワークにわたる脱リン酸化を統括し、その結果、増殖、分化、ストレス応答に影響を与えます。PPP2R1Aの機能変化やPP2Aホロ酵素組成の変動は、リン酸化恒常性の破綻やゲノム不安定性と関連し、PPP2R1Aのバリアントは複数の腫瘍タイプで反復して認められます。本遺伝子は、有糸分裂制御、DNA損傷シグナル、ならびに腫瘍性経路のホスファターゼ介在性調節といった文脈で頻繁に研究されています。

PP2A-Aα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP2R1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP2A-Aα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP2R1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP2R1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP2A-Aαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP2R1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP2A-Aα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP2R1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP2A-Aα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。