PP1γ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401476-ACT

PPP1CC codifica a proteína fosfatase 1 gama (PP1γ), uma fosfatase catalítica de serina/treonina que se associa a diversas subunidades regulatórias para controlar a especificidade de substrato e a localização subcelular. A PP1γ participa de vias centrais dependentes de fosforilação que governam a progressão do ciclo celular, a saída da mitose, as respostas a danos no DNA, a organização do citoesqueleto e o processamento de RNA, por meio da desfosforilação de proteínas-chave de sinalização e estruturais. Ao ajustar o equilíbrio entre quinases e fosfatases, a PPP1CC influencia a dinâmica da cromatina e programas transcricionais que moldam a proliferação e a diferenciação. Alterações na sinalização de PP1 e em redes regulatórias ligadas à PPP1CC têm sido associadas à desregulação do controle de crescimento e a fenótipos de instabilidade genômica relevantes para a biologia do câncer e outros distúrbios proliferativos.

PP1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP1CC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP1γ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP1CC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP1CC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP1γ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP1CC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP1γ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP1γ em células tumorais com expressão de PPP1CC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.