Plásmido CRISPR de Activación (h) POU3F4: sc-404989-ACT

POU3F4 codifica un factor de transcripción con dominio POU que regula programas de expresión génica específicos de tipo celular durante el desarrollo embrionario, con funciones destacadas en el patrón del neuroectodermo y la morfogénesis del oído interno. Al unirse a motivos octámero y cooperar con cofactores, POU3F4 ayuda a coordinar redes transcripcionales que moldean la diferenciación neuronal y la organización del epitelio sensorial. La alteración o desregulación de POU3F4 se asocia con formas hereditarias de pérdida auditiva y malformaciones congénitas del oído interno, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación génica del desarrollo. En modelos basados en células, la modulación de la expresión de POU3F4 permite investigar la especificación de linaje, el control transcripcional dependiente de la cromatina y los circuitos de dianas downstream relevantes para fenotipos auditivos y neurales.

POU3F4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POU3F4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

POU3F4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POU3F4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POU3F4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de POU3F4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POU3F4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de POU3F4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía POU3F4 en células tumorales con expresión de POU3F4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.