POMC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400592-ACT

O POMC humano codifica a proopiomelanocortina, um pró-hormônio neuroendócrino que é processado proteoliticamente em múltiplos peptídeos bioativos, incluindo ACTH e hormônios estimuladores de melanócitos. Esses peptídeos sinalizam por meio de receptores de melanocortina para regular o controle hipotalâmico do apetite e do balanço energético, coordenar a atividade do eixo hipófise–adrenal e influenciar a pigmentação e as respostas ao estresse. A expressão de POMC e o processamento de seus peptídeos estão intimamente ligados a programas transcricionais conduzidos por cAMP/PKA e à maturação dependente de convertases de pró-hormônios nas vias secretórias. A desregulação das vias de POMC está associada a distúrbios da homeostase energética, da função adrenal e da biologia da pigmentação, tornando-o um alvo central para estudos mecanísticos de sinalização neuroendócrina.

POMC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POMC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

POMC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POMC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POMC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de POMC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POMC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de POMC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via POMC em células tumorais com expressão de POMC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.