Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Polycystin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400669
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Polycystin-2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Polycystin-2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Polycystin-2 Anticorpo (YCE2): sc-47734
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Polycystin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400669 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O PKD2 codifica a policistina-2, um canal catiônico não seletivo, permeável a Ca2+, da família TRP, que se localiza nos cílios primários, no retículo endoplasmático e na membrana plasmática para coordenar a mecanossensibilidade e a sinalização intracelular de cálcio. A policistina-2 forma complexos funcionais com a policistina-1 e contribui para vias dependentes de cílios que regulam a polaridade epitelial, a morfogênese tubular e o controle do ciclo celular por meio de efetores ligados ao Ca2+. A disrupção de PKD2 perturba a homeostase de cálcio e programas de sinalização a jusante que influenciam a proliferação, a diferenciação e o transporte de fluidos em epitélios renais e outros. Alterações genéticas em PKD2 estão fortemente associadas à doença renal policística autossômica dominante, tornando-o um nó-chave para investigar a sinalização ciliar e mecanismos relacionados à cistogênese em modelos celulares humanos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Polycystin-2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PKD2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PKD2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PKD2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Polycystin-2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PKD2 para a investigação da sinalização de Polycystin-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PKD2 críticos para a função Polycystin-2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PKD2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Polycystin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Polycystin-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PKD2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Polycystin-2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Polycystin-2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PKD2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PKD2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.