POLR3GL Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-413599-LAC

POLR3GL codifica uma subunidade central da RNA polimerase III que contribui para a transcrição de pequenos RNAs não codificantes, incluindo tRNAs, rRNA 5S e outros transcritos dependentes da Pol III essenciais para a capacidade de síntese proteica e para a homeostase celular. Por meio da regulação do output da Pol III, POLR3GL influencia programas relacionados ao crescimento, respostas ao estresse celular e vias de deteção imunitária inata ligadas a espécies de RNA no citosol. Alterações na função da Pol III e a biogénese desregulada de pequenos RNAs têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a mecanismos mais amplos relevantes para o controlo transcricional em tecidos proliferativos e metabolicamente ativos. Assim, POLR3GL constitui um ponto útil para investigar a regulação transcricional da Pol III, o metabolismo de RNA e os efeitos a jusante nas transições de estado celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais POLR3GL (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de POLR3GL numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais POLR3GL (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição POLR3GL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de POLR3GL. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo POLR3GL e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.