Pol III RPC32 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-417072-LAC

POLR3G codifica a RPC32 da Pol III, uma subunidade central da RNA polimerase III que sustenta a transcrição de pequenos RNAs não codificantes, incluindo tRNAs, o rRNA 5S e outros RNAs regulatórios essenciais para a capacidade de tradução, o crescimento celular e a proteostase. A RPC32 contribui para a montagem do complexo da Pol III e para a iniciação dependente de promotor, integrando-se a vias que acoplam a deteção de nutrientes e a sinalização proliferativa ao rendimento biossintético. A atividade alterada da Pol III e a produção desregulada de pequenos RNAs são frequentemente estudadas no contexto da transformação oncogénica, de respostas ao stress celular e da sinalização imunitária inata desencadeada por espécies de RNA no citosol. Assim, o POLR3G oferece um ponto de entrada mecanístico para investigar o controlo transcricional da biogénese de RNAs não codificantes e o seu impacto em decisões sobre o estado celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pol III RPC32 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de POLR3G numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Pol III RPC32 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição POLR3G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Pol III RPC32. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo POLR3G e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.