Pol I/II/III RPB8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406520

Visão geral

POLR2H codifica a RPB8, uma subunidade pequena e conservada compartilhada pelas RNA polimerases I, II e III, que contribui para a montagem e a estabilidade da polimerase, bem como para sua competência transcricional. Por meio de sua participação na síntese de rRNA (Pol I), na transcrição de mRNA (Pol II) e na produção de tRNA/5S rRNA (Pol III), a RPB8 sustenta programas centrais de expressão gênica que acoplam a transcrição à biogênese de ribossomos, ao controle do ciclo celular e à proteostase. A atividade alterada da maquinaria transcricional basal e de vias de estresse nucleolar pode remodelar o output global de transcritos e a sinalização a jusante, tornando POLR2H um ponto útil para estudar vulnerabilidades transcricionais e o reprograma­mento da expressão em todo o genoma em contextos relevantes para doenças. Seu papel essencial e multpolimerase também oferece uma base mecanística para investigar como fatores gerais de transcrição e estados de cromatina se coordenam entre sistemas de polimerases.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Pol I/II/III RPB8 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLR2H em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLR2H, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLR2H na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Pol I/II/III RPB8.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLR2H para a investigação da sinalização de Pol I/II/III RPB8, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLR2H críticos para a função Pol I/II/III RPB8
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLR2H para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Pol I/II/III RPB8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Pol I/II/III RPB8 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLR2H. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Pol I/II/III RPB8 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Pol I/II/III RPB8 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLR2H para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLR2H definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.