PNPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404406

Visão geral

PNPT1 codifica a polirribonucleotídeo nucleotidiltransferase 1 (PNPase), uma enzima mitocondrial de processamento de RNA que participa da atividade exorribonuclease 3′–5′ e da vigilância de RNA no espaço intermembranar. A PNPase contribui para a expressão gênica mitocondrial ao regular a importação e a renovação (turnover) de pequenos RNAs e ao modular a função do mitorribossomo, influenciando assim a capacidade de fosforilação oxidativa e a bioenergética celular. A disrupção de PNPT1 tem sido associada a fenótipos de disfunção mitocondrial, incluindo defeitos na atividade da cadeia respiratória e respostas ao estresse alteradas, ligadas a um metabolismo de RNA mitocondrial prejudicado. Como resultado, PNPT1 é frequentemente estudado em vias que conectam a homeostase do RNA mitocondrial, a sinalização imune inata desencadeada por espécies de RNA aberrantes e mecanismos relevantes para doenças neurodesenvolvimentais e metabólicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PNPase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PNPT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PNPT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PNPT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PNPase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PNPT1 para a investigação da sinalização de PNPase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PNPT1 críticos para a função PNPase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PNPT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PNPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PNPase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PNPT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PNPase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PNPase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PNPT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PNPT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.