PLSCR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402203-ACT

A PLSCR1 (fosfolipídeo escramblase 1) humana é uma proteína associada à membrana induzível por interferon, implicada na translocação bidirecional de fosfolipídeos, na remodelação da membrana plasmática e na regulação da exposição de fosfatidilserina na superfície celular durante respostas ao estresse celular. Além da dinâmica lipídica, a PLSCR1 tem sido associada à sinalização imune inata e a programas transcricionais a jusante das vias de interferon/JAK–STAT, influenciando respostas antivirais e o controle do crescimento celular. Alterações na expressão de PLSCR1 foram relatadas em múltiplos contextos tumorais e estados inflamatórios, tornando-a um nó útil para estudar mecanismos que conectam a organização de membranas, a sinalização por citocinas e fenótipos mediados pelo sistema imune. Sua ampla localização subcelular e conectividade de vias sustentam aplicações na dissecação da transdução de sinal, de alterações de membrana relacionadas à apoptose e de redes de resposta hospedeiro–patógeno.

PLSCR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLSCR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLSCR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLSCR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLSCR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLSCR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLSCR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLSCR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLSCR1 em células tumorais com expressão de PLSCR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.