PLIC-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404783-NIC

UBQLN2は、ユビキチン様ドメインおよびユビキチン結合（UBA）ドメインをもつタンパク質であるユビキリン2（PLIC-2）をコードしており、ポリユビキチン化された基質を26Sプロテアソームへ搬送するとともに、ER関連分解（ERAD）やオートファジーとも連携します。PLIC-2は、ユビキチン化されたカーゴをプロテアソームに結び付けることでタンパク質品質管理を支え、ミスフォールドタンパク質や凝集しやすいタンパク質の分解回転に影響し、細胞ストレス下でのプロテオスタシス維持に寄与します。UBQLN2依存的なクリアランス経路の破綻は、ユビキチン陽性封入体の形成やプロテアソーム機能障害を特徴とする神経変性様の表現型と関連づけられており、ヒト細胞におけるプロテオスタシス異常のモデル化において重要な標的となっています。生物医学研究では、UBQLN2の機能撹乱は、ユビキチンシグナル伝達、ストレス顆粒および凝集体の生物学、ならびにプロテアソーム分解とオートファジーフラックスのクロストークの解析に用いられています。

PLIC-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBQLN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBQLN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBQLN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBQLN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。