Plfr Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422306-ACT

Prl7d1 de camundongo codifica o membro 1 da subfamília d da família 7 da prolactina (Plfr), uma proteína secretada semelhante a citocina, enriquecida na placenta, implicada na diferenciação do trofoblasto e na biologia da interface materno-fetal. Como parte da família expandida de prolactina/hormônio do crescimento em roedores, o Plfr está associado a processos de sinalização endócrina e parácrina que influenciam a decidualização, o remodelamento vascular placentário e a modulação imune durante a gestação. A expressão desregulada de genes placentários da família da prolactina é frequentemente utilizada como um indicador molecular em estudos de falha de implantação, placentação anormal, restrição de crescimento fetal e inflamação associada à gravidez. Assim, Prl7d1 serve como um marcador útil e como um nó funcional para dissecar redes regulatórias de genes placentários e a fisiologia reprodutiva em modelos murinos.

Plfr O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prl7d1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Plfr O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prl7d1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prl7d1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Plfr. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prl7d1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Plfr no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Plfr em células tumorais com expressão de Prl7d1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.