plexin-C1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403944-ACT

PLXNC1 codifica a plexina-C1, um recetor transmembranar para ligandos semaforina que regula a sinalização dependente de contacto, a remodelação do citoesqueleto e o movimento celular direcional. A plexina-C1 participa em vias semaforina/plexina que acoplam pistas de orientação extracelulares à atividade de GTPases da família Rho no interior da célula, influenciando a dinâmica de adesão, o comportamento de células imunitárias e a padronização dos tecidos. Alterações na expressão de PLXNC1 têm sido relatadas em diversos contextos que envolvem migração desregulada e interações com o microambiente, sustentando a sua utilidade como um nó mecanístico em estudos de invasão, inflamação e comunicação cruzada entre estroma e sistema imunitário. Como recetor humano com saídas de sinalização pleiotrópicas, a plexina-C1 é frequentemente estudada em vias que ligam a sinalização de orientação mediada por recetores à reprogramação transcricional e fenotípica.

plexin-C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLXNC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

plexin-C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLXNC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLXNC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de plexin-C1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLXNC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de plexin-C1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via plexin-C1 em células tumorais com expressão de PLXNC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.