Plásmido CRISPR de Activación (h) PLC γ2: sc-400451-ACT

PLCG2 codifica la fosfolipasa C gamma 2 (PLCγ2), una enzima de transducción de señales que hidroliza PIP2 para generar IP3 y DAG, desencadenando la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C. PLCγ2 actúa aguas abajo de la señalización de inmunorreceptores y receptores Fc e integra señales procedentes de las vías del receptor de células B, receptores de la inmunidad innata y redes de tirosina quinasas para regular la proliferación, la diferenciación, la producción de citocinas y las respuestas de los fagocitos. En biología humana, la alteración de la actividad de PLCG2 se ha vinculado a desregulación inmunitaria y fenotipos inflamatorios, y se estudia ampliamente en células hematopoyéticas, donde programas de señalización dependientes de calcio determinan el destino de las células inmunitarias. Estas propiedades convierten a PLCG2 en un nodo útil para analizar circuitos de señalización proximales al receptor, respuestas transcripcionales y dinámicas de segundos mensajeros dependientes del estímulo.

PLC γ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLCG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLC γ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLCG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLCG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLC γ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLCG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLC γ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLC γ2 en células tumorales con expresión de PLCG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.