Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PLC δ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402474
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PLC δ1 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してPLC δ1ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PLC δ1 抗体 (D-7): sc-393464
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PLC δ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-402474 | 20 µg | $397.00 |
概要
PLCD1はホスホリパーゼCデルタ1（PLCδ1）をコードしており、PIP2を加水分解してセカンドメッセンジャーであるIP3およびジアシルグリセロールを産生する、ホスホイノシチド特異的酵素です。これにより、膜脂質シグナル伝達が細胞内Ca2+放出およびプロテインキナーゼC（PKC）活性化と結び付けられます。これらの出力を介して、PLCδ1は多様な細胞種において、細胞骨格ダイナミクス、分泌、膜輸送、刺激依存的な遺伝子発現の制御に寄与します。PLCD1の活性はGPCRおよび受容体型チロシンキナーゼに連動したシグナル伝達ネットワークと交差し、下流のMAPK経路やCa2+依存性の転写プログラムを調節し得ます。PLCD1が関与するホスホイノシチド／Ca2+シグナルの変調は、複数の疾患関連の状況において、増殖・分化・ストレス応答の破綻と関連付けられており、細胞シグナル伝達や機序病理モデルでの研究対象としての重要性を支持します。
PLC δ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLCD1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLCD1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLCD1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLC δ1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、PLC δ1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLCD1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- PLC δ1の機能に不可欠なPLCD1エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、PLCD1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- PLC δ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLC δ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLCD1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
PLC δ1 HDRプラスミド（h）および PLC δ1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLCD1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLCD1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。