PLC β3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401181-ACT

PLCB3 codifica a fosfolipase C beta 3 (PLCβ3), um efetor-chave a jusante de receptores acoplados à proteína G (GPCRs) que hidrolisa o fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato para gerar inositol 1,4,5-trifosfato e diacilglicerol. Esse eixo de sinalização eleva o Ca2+ intracelular e ativa a proteína quinase C, integrando sinais que regulam secreção, migração, remodelamento do citoesqueleto e programas transcricionais. A atividade da PLCβ3 conecta a sinalização por GPCR ao turnover de fosfoinositídeos e a vias dependentes de cálcio que moldam respostas imunes inatas e adaptativas, bem como transições mais amplas de estado celular. A desregulação da sinalização por fosfolipase C tem sido associada a proliferação aberrante e fenótipos inflamatórios, tornando o PLCB3 um ponto útil para estudos mecanísticos de transdução de sinal e de comportamentos celulares relevantes para doenças.

PLC β3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLCB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLC β3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLCB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLCB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLC β3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLCB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLC β3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLC β3 em células tumorais com expressão de PLCB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.