plasminogen CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401410-ACT

ヒトのPLGはプラスミノーゲンをコードしており、肝臓由来のザイモジェンとして産生された後、プラスミンへと変換されて線溶および広範な細胞外プロテオリシスを駆動します。プラスミノーゲンは、組織型およびウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター、ならびにプラスミン阻害因子との相互作用を介して、血栓の溶解、細胞外マトリックスのリモデリング、細胞遊走を制御し、創傷修復や炎症性プロテアーゼネットワークとも交差します。さらにプラスミン活性は、細胞周囲のプロテオリシスや増殖因子の生物学的利用能にも影響し、PLGを血管恒常性および組織リモデリング経路と結び付けます。プラスミノーゲンの機能または制御の変化は、血栓性疾患や炎症性疾患の状況において、フィブリン除去の破綻やプロテアーゼバランスの乱れと関連しており、止血機構およびマトリックス生物学に関する機序研究を支持します。

plasminogen CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLGの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

plasminogen CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLG 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLG転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性plasminogenの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLG遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるplasminogen依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLG発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるplasminogen経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。