plakophilin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402990-ACT

PKP2 codifica a plakofilina 2, uma proteína com repetições armadillo que se localiza nos desmossomos e nos discos intercalares, onde estabiliza a adesão célula–célula ao conectar as caderinas desmossomais às redes do citoesqueleto. Por meio de interações com desmoplaquina, plakoglobina e filamentos intermediários, a plakofilina 2 contribui para a integridade das junções, a mecanotransdução e a arquitetura tecidual, particularmente em epitélios submetidos a estresse mecânico e em miócitos cardíacos. A função de PKP2 também se integra a programas de sinalização que respondem ao estado de adesão celular e à tensão do citoesqueleto. Alterações genéticas e funcionais em PKP2 têm sido associadas a fenótipos de cardiomiopatia arritmogênica e a defeitos relacionados na condução miocárdica e no remodelamento estrutural, sustentando sua utilidade como alvo em estudos de biologia das junções cardíacas.

plakophilin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PKP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

plakophilin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PKP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PKP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de plakophilin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PKP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de plakophilin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via plakophilin 2 em células tumorais com expressão de PKP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.