PLAA CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422286

概要

Plaaは、ホスホリパーゼA2活性化タンパク質（PLAA）をコードしており、ホスホリパーゼA2の活性およびアラキドン酸由来の脂質メディエーター産生を制御することで、リン脂質シグナル伝達と膜動態に関与するとされる、保存性の高い細胞質因子です。PLAAはユビキチン結合ドメインを有し、ユビキチン依存的な輸送や膜関連タンパク質の分解・ターンオーバーなど、タンパク質品質管理プロセスとの関連が報告されています。これらの機能を介して、PLAAは炎症性シグナルカスケード、エンドリソソームの組織化、ならびに自然免疫および細胞恒常性と交差するストレス応答経路に影響を及ぼし得ます。脂質シグナルの破綻とユビキチン介在性プロテオスタシスの異常は、神経炎症、代謝表現型、変性過程と広く関係するため、Plaaはマウスモデルにおける機構解明研究の有用な結節点となります。

PLAA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPlaa遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Plaa内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Plaaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLAAタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLAAシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Plaa欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLAAの機能に不可欠なPlaaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Plaaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLAA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPLAA CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Plaa遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLAA HDRプラスミド（m）および PLAA HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPlaaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPlaa標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。