PKR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409799-ACT

PROKR1 codifica o receptor de proquineticina 1 (PKR1), um receptor acoplado à proteína G da classe A que se liga às proquineticinas para regular a mobilização de cálcio, a sinalização MAPK/ERK e programas transcricionais a jusante que controlam a quimiotaxia, respostas angiogênicas e a contratilidade do músculo liso. Em tecidos humanos, a sinalização do PKR1 molda o recrutamento de células inflamatórias e a fisiologia vascular e reprodutiva por meio da Gαq e de vias relacionadas. Alterações na atividade de PROKR1 têm sido associadas à desregulação da sinalização inflamatória e a processos de remodelamento vascular, e o gene é estudado no contexto da motilidade gastrointestinal, da sinalização de dor e de distúrbios reprodutivos. Como receptor de superfície celular, o PKR1 oferece um alvo acessível para dissecar a sinalização de GPCR dirigida por ligante e o crosstalk entre vias em modelos celulares primários e engenheirados relevantes.

PKR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PROKR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PROKR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PROKR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PROKR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKR1 em células tumorais com expressão de PROKR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.