PKC zeta Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-422266-ACT-2

O Prkcz murino codifica a proteína quinase C zeta (PKCζ), uma isoforma atípica de PKC que atua como uma quinase de serina/treonina, regulando a polaridade celular, a proliferação e a sobrevivência por meio de sinalização dependente de fosforilação. A PKCζ integra-se às vias PI3K–Akt e NF-κB e coopera com complexos de polaridade PAR para controlar a organização das junções estreitas, a arquitetura epitelial e a migração direcionada. A desregulação da atividade de PRKCZ tem sido associada à sinalização inflamatória, a defeitos na homeostase metabólica e a processos oncogênicos, como alterações no controle do crescimento e na invasão, em diversos sistemas modelo. A edição gênica direcionada a Prkcz em camundongos permite estudos mecanísticos de redes de sinalização dependentes de quinases, do estabelecimento da polaridade e de fenótipos imunes ou metabólicos em linhagens celulares, organoides e modelos in vivo.

PKC zeta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prkcz sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKC zeta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prkcz em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prkcz, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKC zeta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prkcz nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKC zeta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKC zeta em células tumorais com expressão de Prkcz silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.