PKC etaCRISPR激活质粒(h): sc-402297-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PKC eta CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- PKC eta CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 PKC eta CRISPR 激活质粒 (h) 和 PKC eta CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 PRKCH 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PKC η: sc-136036，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PKC etaCRISPR激活质粒(h) | sc-402297-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PKC etaCRISPR激活质粒(h2) | sc-402297-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
PRKCH 编码蛋白激酶 C η（PKCη），这是一种新型 PKC 家族丝氨酸/苏氨酸激酶，位于二酰甘油（DAG）依赖性信号通路的下游被激活，并与磷脂介导的通路相整合。PKCη 参与调控角质形成细胞分化、上皮细胞生长控制、细胞骨架重塑以及应激反应性信号传导，并在不同情境下对 MAPK 和 NF-κB 相关的转录程序发挥作用。在免疫和屏障组织中，PRKCH 活性会影响细胞的激活状态及炎症信号输出，因此与增殖、分化失衡及炎症相关表型的机制研究密切相关。在疾病生物学研究中，人们已考察 PRKCH 表达或信号的改变；由于 PKC 各同工型之间的平衡会影响细胞行为，PRKCH 也可作为通路解析中的功能节点加以利用。
PKC eta CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PRKCH的表达。
PKC eta CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PRKCH基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PRKCH转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PKC eta表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PRKCH位点，并能够研究内源性位点上依赖于PKC eta的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PRKCH表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PKC eta通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。