PKC epsilon Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422261

Descripción general

Prkce codifica la proteína quinasa C épsilon (PKCε), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol que integra señales procedentes de fosfolípidos y de vías activadas por receptores para modular el comportamiento celular. PKCε regula redes de fosforilación que controlan la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y programas de supervivencia celular, y con frecuencia se asocia a las salidas de señalización MAPK/ERK y PI3K–AKT en múltiples tipos celulares. En sistemas murinos, la actividad de Prkce se estudia en el contexto de respuestas al estrés, señalización inflamatoria y remodelación tisular, donde la alteración de la señalización de PKCε puede influir en fenotipos relevantes para la biología metabólica y cardiovascular, así como en procesos asociados a tumores. Estas conexiones funcionales convierten a Prkce en un nodo útil para analizar la comunicación cruzada entre vías impulsadas por quinasas y la plasticidad celular dependiente de señales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prkce en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prkce junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prkce tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKC epsilon.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prkce para la investigación de la señalización de PKC epsilon, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prkce críticos para la función de PKC epsilon
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prkce para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prkce. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKC epsilon (m) y el plásmido HDR PKC epsilon (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prkce para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prkce definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.