PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422261

概要

Prkce は、ジアシルグリセロール（DAG）に応答するセリン／スレオニンキナーゼであるプロテインキナーゼCイプシロン（PKCε）をコードしており、リン脂質や受容体依存性経路からのシグナルを統合して細胞の挙動を制御します。PKCεは、細胞骨格の再編成、小胞輸送、細胞生存プログラムを制御するリン酸化ネットワークを調節し、さまざまな細胞種においてMAPK/ERKおよびPI3K–AKTシグナル伝達の出力と関連づけられることが多いです。マウス系では、Prkce活性はストレス応答、炎症性シグナル、組織リモデリングの文脈で研究されており、PKCεシグナルの変化は、代謝・循環器生物学に関わる表現型や腫瘍関連プロセスに影響し得ます。これらの機能的つながりにより、Prkceはキナーゼ駆動性経路間クロストークや、シグナル依存的な細胞可塑性を解析するうえで有用な結節点となります。

PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrkce遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prkce内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prkceのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKC epsilonタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKC epsilonシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prkce欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKC epsilonの機能に不可欠なPrkceエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prkceゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPKC epsilon CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prkce遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKC epsilon HDRプラスミド（m）および PKC epsilon HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrkceホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrkce標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。