PKC epsilon Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400358

Descripción general

PRKCE codifica la proteína quinasa C épsilon (PKCε), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol que transmite señales aguas abajo de las vías de los GPCR y de los receptores tirosina quinasa. PKCε regula redes de fosforilación que controlan la supervivencia celular, la proliferación, la remodelación del citoesqueleto y la migración dirigida, con funciones destacadas en la señalización MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB y de adhesiones focales. En células humanas, PKCε también influye en el tráfico vesicular y en las respuestas al estrés mitocondrial, conectando la señalización por segundos mensajeros con la adaptación metabólica. La actividad y la expresión desreguladas de PRKCE/PKCε se han asociado con fenotipos oncogénicos, mecanismos de resistencia a terapias y una señalización inflamatoria alterada, lo que la convierte en un objetivo frecuente en estudios de mapeo de vías y de genómica funcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRKCE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRKCE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRKCE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKC epsilon.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRKCE para la investigación de la señalización de PKC epsilon, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRKCE críticos para la función de PKC epsilon
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRKCE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PKC epsilon CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRKCE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKC epsilon (h) y el plásmido HDR PKC epsilon (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRKCE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRKCE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.