PKC delta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400287-ACT

PRKCD codifica a proteína quinase C delta (PKCδ), uma quinase de serina/treonina responsiva ao diacilglicerol que integra sinais acionados por receptores a programas de fosforilação a jusante que controlam proliferação, diferenciação, apoptose e remodelamento do citoesqueleto. A PKCδ participa do crosstalk entre as vias PKC/MAPK e PI3K–AKT, modula a sinalização inflamatória dependente de NF-κB e regula respostas a danos no DNA por meio da fosforilação de efetores de estresse e de checkpoint. Em células imunes e hematopoéticas, o PRKCD ajuda a ajustar a sinalização do receptor de células B e a tolerância, enquanto em contextos epiteliais influencia a adesão e o comportamento migratório. A atividade ou expressão desregulada de PRKCD tem sido associada a alterações nos limiares de apoptose, fenótipos inflamatórios e reprogramação de sinalização oncogênica, tornando-o um nó relevante para estudos mecanísticos centrados em vias.

PKC delta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKCD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKC delta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKCD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKCD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKC delta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKCD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKC delta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKC delta em células tumorais com expressão de PRKCD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.