PKC beta CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400263-ACT

PRKCBはプロテインキナーゼCベータ（PKCβ）をコードしており、ジアシルグリセロールおよびCa2+に応答するセリン／スレオニンキナーゼとして、ホスホリパーゼCに共役した受容体からのシグナルを伝達します。ヒト細胞では、PKCβはNF-κBおよびMAPKシグナル伝達、細胞骨格リモデリング、小胞輸送、ならびに細胞周期や生存の意思決定を制御するリン酸化ネットワークを調節します。PRKCB活性はB細胞受容体（BCR）およびFc受容体シグナル伝達と密接に関連し、炎症性メディエーター産生や酸化ストレス応答を形作ります。PKCβシグナルの破綻は、異常な免疫活性化や腫瘍性シグナル伝達プログラムに関与するとされており、PRKCBは状況依存的なキナーゼ経路の再配線を研究するうえで有用な結節点となります。

PKC beta CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKCBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PKC beta CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKCB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKCB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PKC betaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKCB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPKC beta依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKCB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPKC beta経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。