PKC beta Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400263-ACT

PRKCB codifica a proteína quinase C beta (PKCβ), uma quinase de serina/treonina responsiva a diacilglicerol e Ca2+ que transduz sinais de receptores acoplados à fosfolipase C. Em células humanas, a PKCβ regula redes de fosforilação que controlam a sinalização de NF-κB e MAPK, a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e decisões relacionadas ao ciclo celular e à sobrevivência. A atividade de PRKCB está intimamente ligada à sinalização do receptor de células B e de receptores Fc e molda a produção de mediadores inflamatórios e as respostas ao estresse oxidativo. A desregulação da sinalização de PKCβ tem sido implicada em ativação imune aberrante e em programas de sinalização oncogênica, tornando PRKCB um nó útil para estudar a reprogramação dependente do contexto de vias de quinases.

PKC beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKCB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKC beta O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKCB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKCB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKC beta. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKCB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKC beta no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKC beta em células tumorais com expressão de PRKCB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.