PKC alpha CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400128-ACT

PRKCA は、プロテインキナーゼCα（PKCα）をコードしている。PKCαは古典型の、カルシウムおよびジアシルグリセロールに応答するセリン／スレオニンキナーゼであり、ホスホリパーゼCの下流でシグナルを伝達し、リン酸化依存的な細胞増殖・分化の制御、細胞骨格リモデリング、ならびに小胞輸送を調節する。PKCαは受容体媒介性の入力シグナルを統合して、MAPK/ERKシグナル伝達、NF-κB活性、PI3K–AKTネットワーク内のフィードバックを調節し、転写プログラムや細胞ストレス応答の形成に関与する。PRKCAの発現変化やPKCαシグナルの異常は、さまざまな疾患関連の状況において、増殖制御の破綻、浸潤能、炎症性シグナルの異常と結び付けられており、機序解明のための経路解析で広く用いられるノードとなっている。ヒトのモデル系では、PRKCAの改変はシグナル伝達ダイナミクス、キナーゼ―基質関係、コンテキスト依存的な経路クロストークの研究を支える。

PKC alpha CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRKCAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PKC alpha CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRKCA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRKCA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PKC alphaの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRKCA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPKC alpha依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRKCA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPKC alpha経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。