PKAα cat Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400262-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKAα catO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PKAα cat (h) e o Plasmídeo Double Nickase PKAα cat (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PRKACA. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKAα cat Anticorpo (A-2): sc-28315
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKAα cat Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKAα cat Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKACA codifica a subunidade catalítica alfa da proteína quinase A dependente de AMPc (PKAα), um efetor central da sinalização GPCR–adenilil ciclase que fosforila diversos substratos que controlam o metabolismo, a atividade de canais iônicos, a transcrição e a progressão do ciclo celular. A PKAα regula a expressão gênica dependente de CREB e integra-se a nós das vias MAPK, cálcio e AKT para moldar respostas celulares específicas do contexto. A atividade aberrante de PRKACA está associada à desregulação da sinalização por AMPc e tem sido implicada na biologia tumoral endócrina e hepática, na hiperfunção adrenal e em programas de diferenciação alterados. Como uma quinase central no eixo AMPc/PKA, PRKACA é amplamente estudado em transdução de sinais, respostas ao estresse e mapeamento de redes fosfoproteômicas.
PKAα cat O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PRKACA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PRKACA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PRKACA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PRKACA interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.