PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422243

Visão geral

O gene **Pip5k1a** de camundongo codifica a fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinase do tipo I alfa (**PIPK I α**), uma quinase lipídica que gera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (**PI(4,5)P2**) na membrana plasmática e em compartimentos de endomembranas. O PI(4,5)P2 sustenta a sinalização dependente de fosfoinositídeos e organiza a dinâmica do citoesqueleto de actina, a renovação de adesões focais e o tráfego de membranas, influenciando assim a migração celular, a citocinese e a transdução de sinais acionada por receptores. Por meio do acoplamento à produção de segundos mensageiros mediada por PLC e da regulação do eixo PI3K, a PIPK I α ajuda a ajustar vias que controlam proliferação e sobrevivência. O metabolismo desregulado de fosfoinositídeos e a remodelação do citoesqueleto dependente de PI(4,5)P2 estão implicados na biologia do câncer, na função de células imunes e em processos neurológicos, tornando **Pip5k1a** um ponto útil para estudos mecanísticos desses fenótipos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pip5k1a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pip5k1a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pip5k1a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PIPK I α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pip5k1a para a investigação da sinalização de PIPK I α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pip5k1a críticos para a função PIPK I α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pip5k1a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pip5k1a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PIPK I α Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PIPK I α (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pip5k1a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pip5k1a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.