Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PINK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400739-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PINK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PINK1 Double Nickase Plasmid (h) e il PINK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PINK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PINK1 Antibody (38CT20.8.5): sc-517353
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PINK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400739-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PINK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400739-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PINK1 (PTEN-induced kinase 1) codifica una chinasi serina/treonina indirizzata ai mitocondri che agisce come sensore chiave del danno mitocondriale e regolatore del controllo di qualità degli organelli. In seguito alla perdita del potenziale di membrana mitocondriale, PINK1 si accumula sulla membrana mitocondriale esterna e promuove l’ubiquitinazione, dipendente da PARKIN, di substrati mitocondriali, avviando la mitofagia e il rimodellamento della dinamica mitocondriale. Attraverso questa via, PINK1 influenza le risposte allo stress ossidativo, l’omeostasi bioenergetica e la segnalazione infiammatoria legata alla disfunzione mitocondriale. L’alterazione dell’attività di PINK1 è fortemente associata alla malattia di Parkinson a esordio precoce ed è ampiamente studiata in modelli di neurodegenerazione e patologia mitocondriale.
PINK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PINK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PINK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PINK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PINK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.