Pin1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400485-ACT

PIN1 codifica a peptidil-prolil cis/trans isomerase NIMA-interacting 1 (Pin1), uma isomerase de prolina dependente de fosforilação que reconhece motivos Ser/Thr-Pro e remodela proteínas-alvo após a fosforilação. Ao acoplar a alternância conformacional ao estado de modificações pós-traducionais, a Pin1 regula a progressão do ciclo celular, programas transcricionais, a sinalização de dano ao DNA e a proteostase em múltiplas vias reguladas por quinases. A atividade de Pin1 pode influenciar a estabilidade e a função de reguladores-chave como p53, ciclinas e fatores de transcrição, ligando-a ao controle da proliferação e das respostas ao estresse. A expressão ou atividade desregulada de PIN1 tem sido associada à sinalização oncogênica e a processos neurodegenerativos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da regulação dependente de fosforilação.

Pin1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pin1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pin1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pin1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pin1 em células tumorais com expressão de PIN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.