Pim-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402784-ACT

PIM3 codifica a Pim-3, uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa da família PIM, que integra sinais de citocinas e fatores de crescimento para regular a progressão do ciclo celular, a sinalização de sobrevivência e o metabolismo celular. A Pim-3 modula o controlo, dependente de fosforilação, de programas apoptóticos e proliferativos, cruzando-se com vias como JAK/STAT e redes associadas a PI3K/AKT que influenciam a transcrição e a tradução. A expressão aberrante de PIM3 foi reportada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente avaliada em conjunto com leituras de resposta ao stress e de integridade mitocondrial. Em modelos de imunologia e biologia do cancro, a Pim-3 é utilizada para estudar a plasticidade de sinalização impulsionada por quinases, o equilíbrio proliferação–apoptose e o crosstalk entre vias que sustenta fenótipos adaptativos.

Pim-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIM3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pim-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIM3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIM3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pim-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIM3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pim-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pim-3 em células tumorais com expressão de PIM3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.