Pim-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401715-ACT

PIM2 codifica a Pim-2, uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa que integra sinais de citocinas e fatores de crescimento para promover sobrevivência celular, proliferação e adaptação metabólica. A Pim-2 fosforila reguladores de sinalização e de apoptose, sustentando o controle traducional e a resistência ao estresse celular, e interage funcionalmente com programas associados a JAK/STAT, PI3K/AKT/mTOR e NF-κB. A expressão ou atividade desregulada de PIM2 tem sido associada a alterações na homeostase de células hematopoéticas e em redes de sinalização oncogênicas, particularmente em contextos em que vias de sobrevivência permanecem ativadas de forma persistente. Como moduladora de checkpoints dependentes de fosforilação, a Pim-2 é frequentemente estudada por seus efeitos sobre a apoptose, a progressão do ciclo celular e fenótipos de resposta à terapia em sistemas modelo.

Pim-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pim-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pim-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pim-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pim-2 em células tumorais com expressão de PIM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.