PILR-α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407310

Descripción general

PILRA (receptor alfa tipo 2 similar a inmunoglobulina emparejado) codifica un receptor inhibidor de superficie celular enriquecido en poblaciones mieloides, donde reconoce ligandos de O‑glicanos sialilados y transmite señales supresoras mediante el reclutamiento dependiente de ITIM de fosfatasas como SHP‑1/2. Al atenuar los programas de activación asociados a receptores Fc y a TLR, PILR‑α contribuye a la regulación de los umbrales de la inmunidad innata, la producción de citocinas y las funciones efectoras de los leucocitos. Esta actividad tipo “checkpoint” vincula a PILR‑α con vías que gobiernan la homeostasis inflamatoria, la activación de células presentadoras de antígeno y mecanismos de evasión inmunitaria. La expresión alterada de PILRA o la interacción con sus ligandos se ha implicado en la neuroinflamación y en la biología de enfermedades infecciosas, lo que lo hace relevante para estudios de la regulación mieloide en microambientes tisulares complejos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PILR-α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PILRA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PILRA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PILRA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PILR-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PILRA para la investigación de la señalización de PILR-α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PILRA críticos para la función de PILR-α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PILRA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PILR-α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PILR-α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PILRA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PILR-α (h) y el plásmido HDR PILR-α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PILRA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PILRA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.