PILR-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407310

Panoramica

PILRA (paired immunoglobulin-like type 2 receptor alpha) codifica un recettore inibitorio di superficie cellulare arricchito nelle popolazioni mieloidi, in cui riconosce ligandi O-glicani sialilati e trasduce segnali soppressivi tramite il reclutamento, dipendente da ITIM, di fosfatasi quali SHP-1/2. Attenuando i programmi di attivazione associati ai recettori Fc e ai TLR, PILR-α contribuisce alla regolazione delle soglie dell’immunità innata, della produzione di citochine e delle funzioni effettrici dei leucociti. Questa attività, simile a un checkpoint, collega PILR-α a vie che governano l’omeostasi infiammatoria, l’attivazione delle cellule presentanti l’antigene e i meccanismi di evasione immunitaria. Un’espressione alterata di PILRA o l’interazione con i suoi ligandi è stata implicata nella neuroinfiammazione e nella biologia delle malattie infettive, rendendolo rilevante per studi sulla regolazione mieloide in microambienti tissutali complessi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PILR-α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PILRA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PILRA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PILRA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PILR-α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PILRA per lo studio della segnalazione di PILR-α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PILRA critici per la funzione di PILR-α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PILRA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PILR-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PILR-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PILRA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PILR-α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PILR-α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PILRA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PILRA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.