As células A-431 tratadas com EGF foram processadas utilizando o PhosphoCruzTM Protein Purification System sc-24964. Fig. 1: Os blots foram sondados com o anticorpo fosfotirosina sc-508, para detetar EGFR fosforilado em tirosina. Linhas A/B: fracções de coluna não ligadas. Pistas C/D: fracções da coluna ligadas (enriquecidas com fosfoproteínas). Pistas E/F: lisados de células inteiras preparados a partir de culturas não tratadas e tratadas com EGF, respetivamente. Fig. 2: As mesmas amostras apresentadas na Fig. 1 foram analisadas com o anticorpo para HSP 60, sc-13115.
As células A-431 tratadas com EGF foram processadas utilizando o PhosphoCruzTM Protein Purification System sc-24964. Fig. 1: Os blots foram sondados com o anticorpo fosfotirosina sc-508, para detetar EGFR fosforilado em tirosina. Linhas A/B: fracções de coluna não ligadas. Pistas C/D: fracções da coluna ligadas (enriquecidas com fosfoproteínas). Pistas E/F: lisados de células inteiras preparados a partir de culturas não tratadas e tratadas com EGF, respetivamente. Fig. 2: As mesmas amostras apresentadas na Fig. 1 foram analisadas com o anticorpo para HSP 60, sc-13115.
As células A-431 tratadas com EGF foram processadas utilizando o PhosphoCruzTM Protein Purification System sc-24964. Fig. 1: Os blots foram sondados com o anticorpo fosfotirosina sc-508, para detetar EGFR fosforilado em tirosina. Linhas A/B: fracções de coluna não ligadas. Pistas C/D: fracções da coluna ligadas (enriquecidas com fosfoproteínas). Pistas E/F: lisados de células inteiras preparados a partir de culturas não tratadas e tratadas com EGF, respetivamente. Fig. 2: As mesmas amostras apresentadas na Fig. 1 foram analisadas com o anticorpo para HSP 60, sc-13115.
PhosphoCruz™ Protein Purification System: sc-24964
affinity purification system devised to enrich/isolate phosphoproteins from cell lysates and tissue extracts for phosphorylation studies; proteins that carry a phosphate group are retained on the column while non-phosphorylated and undesired contaminants pass through
typical phosphoenriched protein yield is 5-10% of total protein
contains materials required for six individual phosphoprotein enrichment procedures including six single-use columns, 100 ml 2X Binding/Wash Buffer, 30 ml Eluting Buffer, 150 µl each Phosphatase Inhibitor Cocktails 1 and 2, and six ultrafiltration concentrators for concentrating phosphoenriched protein post-purification