phapi2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422189
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- phapi2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico phapi2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
phapi2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422189 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Pemt de camundongo codifica a fosfatidiletanolamina N-metiltransferase, uma enzima-chave na biossíntese de fosfatidilcolina que catalisa a metilação sequencial da fosfatidiletanolamina usando S-adenosilmetionina. Essa atividade sustenta a homeostase dos fosfolipídios de membrana, a montagem de lipoproteínas e o metabolismo de doadores de metil, conectando a PEMT ao remodelamento lipídico e às respostas celulares ao estresse. A produção de fosfatidilcolina dependente de Pemt é particularmente relevante para o manejo de lipídios no fígado, a função do retículo endoplasmático e processos de sinalização que dependem da composição da membrana. A perturbação de vias mediadas por PEMT tem sido associada a fenótipos de metabolismo lipídico alterado e fornece um modelo acessível para estudar mecanismos metabólicos e associados à membrana.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO phapi2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pemt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pemt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pemt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína phapi2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pemt para a investigação da sinalização de phapi2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pemt críticos para a função phapi2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pemt para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo phapi2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo phapi2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pemt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo phapi2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR phapi2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pemt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pemt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.