PGRMC2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405132-ACT

O componente 2 do receptor de progesterona associado à membrana (PGRMC2) é uma proteína associada à membrana com capacidade de ligação ao heme, implicada no metabolismo de esteróis, no tráfego de membranas e na regulação de reações oxidativas dependentes do citocromo P450. Em células humanas, o PGRMC2 tem sido associado ao manejo intracelular do colesterol e a processos ligados ao retículo endoplasmático que moldam a homeostase lipídica e as respostas celulares ao estresse. Sua atividade se intersecta com vias que governam a função mitocondrial/RE, o equilíbrio redox e a organização de complexos proteicos, o que o torna relevante para estudos de reprogramação metabólica. Alterações na expressão ou na sinalização de PGRMC2 têm sido associadas a fenótipos observados em biologia do câncer, regulação endócrina e estados inflamatórios, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em modelos relevantes para doenças.

PGRMC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGRMC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PGRMC2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGRMC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGRMC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PGRMC2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGRMC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PGRMC2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PGRMC2 em células tumorais com expressão de PGRMC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.