Perilipin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401305-ACT

PLIN1 codifica a perilipina-1, uma proteína de suporte associada às gotículas lipídicas que regula o armazenamento e a mobilização de lípidos neutros em adipócitos ao controlar o acesso de lipases, como a ATGL e a lipase sensível a hormonas, ao triacilglicerol. Por meio de remodelação dependente de fosforilação, a perilipina integra a sinalização cAMP/PKA com programas lipolíticos e lipogénicos, moldando o fluxo de ácidos gordos, o tamanho do adipócito e a dinâmica das gotículas lipídicas. Alterações na expressão ou na função de PLIN1 têm sido associadas a desregulação da homeostase do tecido adiposo, a fenótipos metabólicos ligados à resistência à insulina e a quadros semelhantes a lipodistrofia, tornando-o um ponto relevante em estudos de biologia dos adipócitos e do equilíbrio energético sistémico. Em modelos celulares, a atividade de PLIN1 cruza-se com vias que governam a utilização de substratos mitocondriais, respostas de stress do RE (retículo endoplasmático) à sobrecarga lipídica e sinalização inflamatória impulsionada pela acumulação ectópica de lípidos.

Perilipin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLIN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Perilipin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLIN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLIN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Perilipin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLIN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Perilipin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Perilipin em células tumorais com expressão de PLIN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.