Per2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401089-ACT

O PER2 humano codifica o regulador circadiano central Per2, uma proteína que contém domínio PAS e participa dos ciclos de retroalimentação transcricional–traducional que controlam a ritmicidade de 24 horas. O PER2 coordena a transcrição dirigida por CLOCK/ARNTL (BMAL1) ao modular a dinâmica de complexos repressores e integra informações temporais a programas celulares como metabolismo, respostas a dano no DNA e progressão do ciclo celular. Ao acoplar a transcrição circadiana a vias de sinalização que incluem redes ligadas a glicocorticoides, AMPK e MAPK, o PER2 influencia a expressão rítmica de genes de forma específica por tecido. A atividade desregulada de PER2 e o desalinhamento circadiano têm sido associados a distúrbios do sono–vigília e a alterações na suscetibilidade a fenótipos oncogênicos e metabólicos, tornando-o um alvo útil em biologia de sistemas e estudos mecanísticos.

Per2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PER2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Per2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PER2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PER2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Per2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PER2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Per2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Per2 em células tumorais com expressão de PER2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.