Plasmide CRISPR d'Activation (h) Peptide YY: sc-403446-ACT

Le gène humain PYY code le peptide YY, un peptide endocrinien d’origine intestinale libéré principalement par les cellules L entéroendocrines en réponse à l’apport en nutriments. Le peptide YY participe à la signalisation neuroendocrinienne via des récepteurs couplés aux protéines G de la famille Y, modulant des voies liées à l’AMPc qui influencent la régulation de l’appétit, la motilité gastro-intestinale et la sécrétion pancréatique. Dans les tissus périphériques et le système nerveux central, PYY contribue à une homéostasie métabolique coordonnée et à la communication le long de l’axe intestin–cerveau. Une expression ou une sécrétion altérée de PYY a été associée à un déséquilibre de la balance énergétique et à des phénotypes métaboliques, ce qui soutient son utilisation comme indicateur moléculaire dans des études sur l’obésité, la physiologie liée au diabète de type 2 et la fonction gastro-intestinale.

Peptide YY Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PYY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Peptide YY Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PYY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PYY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Peptide YY. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PYY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Peptide YY au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Peptide YY dans les cellules tumorales présentant une expression de PYY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.