Peptide YY Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403446-ACT

O gene humano PYY codifica o peptídeo YY, um peptídeo endócrino derivado do intestino, liberado principalmente por células L enteroendócrinas em resposta à ingestão de nutrientes. O peptídeo YY atua em sinalização neuroendócrina por meio de receptores acoplados à proteína G da família Y, modulando vias associadas ao cAMP que influenciam a regulação do apetite, a motilidade gastrointestinal e a secreção pancreática. Em tecidos periféricos e no sistema nervoso central, o PYY contribui para uma homeostase metabólica coordenada e para a comunicação ao longo do eixo intestino–cérebro. Alterações na expressão ou secreção de PYY têm sido associadas a desregulação do balanço energético e a fenótipos metabólicos, sustentando seu uso como leitura molecular em estudos de obesidade, fisiologia relacionada ao diabetes tipo 2 e função gastrointestinal.

Peptide YY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PYY sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Peptide YY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PYY em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PYY, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Peptide YY. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PYY nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Peptide YY no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Peptide YY em células tumorais com expressão de PYY silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.