Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PEPT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401259-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PEPT1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PEPT1ダブルニカースプラスミド（h）およびPEPT1ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC15A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PEPT1 抗体 (E-3): sc-373742
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PEPT1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401259-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PEPT1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401259-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC15A1はPEPT1をコードしており、PEPT1はプロトン共役型のオリゴペプチドトランスポーターとして、特に小腸において上皮細胞の頂端膜（アピカル膜）を介し、ジペプチドおよびトリペプチド、ならびにペプチド様の生体異物（ゼノバイオティクス）の取り込みを担います。PEPT1は膜を挟んだH+勾配に基質輸送を共役させることで、アミノ酸利用や上皮の代謝プログラムと連動しつつ、栄養吸収と細胞の窒素恒常性を支えます。その活性は腸管バリアの生理や上皮分化にも影響し、トランスポーターにより制御される栄養取り扱いに影響する炎症性・代謝性の状況において、SLC15A1発現の変化が報告されています。さらにPEPT1はペプチドミメティック化合物も輸送するため、SLC15A1は溶質キャリア（SLC）の制御、膜輸送の反応速度論、上皮ストレス応答を研究するモデルとしても用いられます。
PEPT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC15A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC15A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC15A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC15A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。