Pepsin C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404137

概要

PGCは、アスパラギン酸エンドペプチダーゼ（ガストリクシン）であるペプシンCをコードしています。ペプシンCは前駆体（ザイモゲン）として分泌され、酸性条件下で活性化されて胃内のタンパク質分解に関与します。胃では、ペプシンCは腔内でのタンパク質消化やペプチドのプロセシングに寄与し、ペプシンAの働きを補完する酸依存的なプロテアーゼネットワークの中で機能します。PGCの発現やペプシンC分泌パターンの変化は、胃粘膜の分化状態や上皮の恒常性の変化を示す指標として用いられてきました。胃のプロテアーゼプログラムの制御異常は、上部消化管における炎症に伴うリモデリングや腫瘍化（新生物への変化）との関連でしばしば検討されており、胃細胞モデルや組織由来システムを用いた機序解明研究を支持しています。

Pepsin C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPGC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PGC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PGCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pepsin Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pepsin Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PGC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pepsin Cの機能に不可欠なPGCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PGCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pepsin C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPepsin C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PGC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pepsin C HDRプラスミド（h）および Pepsin C HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPGCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPGC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。