Pepsin C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404137-ACT

O PGC codifica a pepsina C (progastricsina), uma endopeptidase aspártica produzida principalmente pelas células principais gástricas e secretada como um zimogénio inativo, que se torna proteoliticamente ativo em ambientes ácidos. Uma vez ativada, a pepsina C contribui para o processamento luminal de proteínas e apoia a fisiologia da mucosa gástrica por meio de secreção regulada e atividade proteásica na rede de enzimas digestivas. Padrões aberrantes de expressão de PGC são amplamente usados como indicadores de alteração na diferenciação do epitélio gástrico e de remodelação da mucosa, ligando este gene à investigação sobre inflamação gástrica, metaplasia e transformação neoplásica. Como um gene de protease enriquecido no estômago, o PGC também é informativo para estudar programas de linhagem epitelial e alterações de proteostase associadas à biologia das doenças gástricas.

Pepsin C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pepsin C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pepsin C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pepsin C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pepsin C em células tumorais com expressão de PGC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.