Plásmido CRISPR de Activación (h) Pellino 2: sc-402305-ACT

El gen humano **PELI2** codifica **Pellino 2**, una ligasa E3 de ubiquitina que ayuda a acoplar la señalización de los receptores de reconocimiento de patrones con respuestas inflamatorias y antivirales posteriores. Pellino 2 participa en la regulación dependiente de ubiquitina de complejos adaptadores y de quinasas dentro de las vías de los receptores tipo Toll y del receptor de interleucina-1, modulando la activación de las rutas de señalización **NF-κB** y **MAPK** e influyendo en la producción de citocinas. Al modular el recambio de proteínas y la amplitud de la señal, **PELI2** contribuye a la homeostasis de la inmunidad innata y a las respuestas celulares al estrés relevantes para la desregulación de la señalización inflamatoria. La regulación alterada de la ubiquitinación y de las vías de inmunidad innata en las que participa Pellino 2 se ha estudiado en el contexto de mecanismos de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario y de las interacciones huésped–patógeno.

Pellino 2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PELI2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pellino 2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PELI2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PELI2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pellino 2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PELI2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pellino 2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pellino 2 en células tumorales con expresión de PELI2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.